Contenido

• instrucciones
• Recuperar la columna
• consejos
• advertencia
• Qué necesitas

Cromatografía Líquida de Alta Eficiencia (HPLC) es un método común de análisis de laboratorio en el que una muestra se separa en sus componentes químicos conforme pasa a través de una columna. Esta columna se llena con un material poroso, típicamente gel de sílice. Una columna estándar de fase reversa, así como la C8, algunas veces puede obstruir o quedar contaminada. Estas columnas se pueden recuperar utilizando técnicas sencillas.

instrucciones

El solvente correcto puede recuperar una columna sucia (Jupiterimages / liquidlibrary / Getty Images)

Recuperar la columna

1. Desacople la columna y revierte su posición, de manera que la fase móvil ahora esté entrando por lo que normalmente es la salida de la columna. Acople una salida en la otra punta de la columna (que era la entrada original), y deje escurrir dentro de un descarte.

2. Bombee una serie de disolventes en orden de polaridad decreciente. Una serie básica recomendada es comenzar con metanol, luego pasar a la acetonitrila, entonces acetonitrila / isopropanol (75:25), isopropanol, cloruro de metileno y hexano. Si la fase móvil que estaba en la columna era absorbente, un paso con agua antes en el metanol se recomienda. Un flujo de uno a dos mililitros por minuto es suficiente, y aproximadamente diez columnas de volumen de cada solvente deben ser bombeados. La columna de volumen es el espacio interno de la columna, y se calcula por (0.7 x pi x (DI / 2) ^ 2 x L), donde DI es el diámetro interno de la columna y L es la longitud.

   
   

3. Bombee otros diez volúmenes de isopropanol por la columna para prepararla para su uso con la fase móvil original. Si la fase móvil original se ha amortiguado, también bombee agua por la columna después del isopropanol, antes de volver a la fase móvil original.

4. Desacople la columna, vuélvala y vuelva a conectar, para que quede en su posición original (para que la fase móvil entre por el lado correcto de la columna). Vuelva a conectar la salida de la columna del detector.

consejos

• Si este proceso no borra completamente la columna, se puede utilizar una mezcla 50:50 de dimetil sulfóxido (DMSO) y dimetil formamida (DMF). Los residuos de proteínas y los iones metálicos pueden requerir otros tipos de disolventes, como reactivos pareadores de iones o una solución de ácido tetracético de etileno diamina (EDTA).

advertencia

• En algunos aparatos, la columna tendrá un tamiz de metal áspero como entrada. En ese caso, revertir la columna permitirá que la fase estacionaria salga de la columna, y esto no se recomienda. Consulte a su vendedor si no está seguro.
• El disolvente utilizado en este proceso es potencialmente tóxico cuando se ingiere y se inhala. Utilice precauciones de laboratorio normales al manipular.

Qué necesitas

• Aparato de HPLC
• agua
• metanol
• acetonitrilo
• isopropanol
• Cloruro de metileno
• hexano