Contenido
- Rompiendo paredes celulares
- Eliminación de lípidos
- Eliminación de proteínas
- Precipitación del ADN
- Purificando el ADN
El alcohol helado se utiliza para separar el ADN de soluciones a base de agua, permitiendo que sea purificado para la prueba genética subsiguiente. La adición de alcohol a una solución que contiene ADN es una manera simple de hacerlo puro a temperaturas más bajas y retardar las enzimas que lo degradan, dando mejores resultados de extracción.
Rompiendo paredes celulares
Los procedimientos de extracción para la obtención de ADN puro tienen que deshacerse de todos los componentes moleculares y químicos del tejido a partir del cual se extrae el ADN. Los primeros pasos implican la destrucción de las paredes celulares. Esto se puede hacer con varios agentes químicos que son cáusticos a las membranas celulares, pero no dañan el ADN. Las células también pueden ser soñadas, homogeneizadas o molidas para destruir las membranas.
Eliminación de lípidos
Después de que las paredes de las células se destruyen, un detergente se agrega para deshacerse de las grasas y aceites que componen las membranas celulares. Los detergentes causan la disolución de aceites y grasas en solución.
Eliminación de proteínas
Las proteínas y enzimas pueden ser digeridas por la adición de una proteasa a la solución. Las proteasas quebran proteínas en pequeños péptidos y aminoácidos.
Precipitación del ADN
La adición de alcohol helado a una solución causará la precipitación y la agregación del ADN. El material genético puede ser recogido por centrifugación de la muestra y decantando la capa de líquido. Debe existir como un pequeño sedimento en el fondo del tubo de centrifugado.
Purificando el ADN
El ADN puede ser lavado por re-suspensión en una solución fría de alcohol y re-centrifugado varias veces para obtener una muestra muy pura. Los alcoholes típicos utilizados incluyen el etanol y el isopropanol. Este proceso deja una muestra muy pura en pruebas rigurosas.
