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La cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) es una herramienta que se utiliza para separar sustancias de una mezcla. La separación e identificación de determinados productos químicos se produce principalmente en la columna cromatográfica del sistema. Hay muchos tipos de columnas disponibles para CLAE y cada uno se utiliza para un tipo específico de análisis. La columna C18 es la no polar más fuerte que se utiliza generalmente. Después de un uso continuo durante un período prolongado de tiempo, la velocidad de flujo del disolvente a través de él disminuye y aumenta el tiempo de análisis. Otra causa de la disminución del tiempo de análisis es tener muestras que dejan pequeñas cantidades de productos químicos en el material de la columna, lo que reduce la capacidad de separarlos. La restauración de su superficie se puede realizar tratando el material con una serie de disolventes específicos para limpiarlo de las muestras restantes y revitalizar el material de soporte.
Paso 1
Retire la columna C18 de la dirección del flujo y colóquela en la dirección opuesta. Hacer que el solvente vuelva a pasar aliviará el efecto de acumulación que se produce con el tiempo. Se debe tener cuidado de no dejar demasiado material acumulado al final de la columna. Algunas fábricas usan una malla más grande en la parte superior para que cuando el flujo cambie de dirección, la malla esté en la posición de abajo. Este método de restauración se llama inversión de flujo. Para evitar que la acumulación fluya hacia el detector del sistema y posiblemente cause una obstrucción, deje que funcione sin el detector conectado y dirija el flujo de la columna a la eliminación.
Paso 2
Coloque el tubo de paso de disolvente en una serie de disolventes para eluir cualquier compuesto retenido en la columna en la dirección opuesta. Estos disolventes varían en sus características hidrófilas. Al variarlos, eluirá compuestos de naturaleza hidrófila igualmente diversa. Utilice 50 ml de cada uno de los siguientes disolventes, sucesivamente: agua (si utiliza un tampón), metanol, isopropanol, diclorometano, hexano, diclorometano e isopropanol.
Paso 3
Vuelva a colocar la columna en la dirección correcta y haga que el disolvente fluya a través de ella. Use al menos 75 ml para lavarlo antes de continuar. Pruébelo con un patrón que utilizó cuando era nuevo y verifique los resultados. Preste atención al alcanzar los puntos máximos de retención y el tiempo total de análisis. El grado en que estos atributos coincidan con la prueba inicial cuando aún era nueva indicará el grado en que se restauró la columna. Si los resultados no son satisfactorios, reemplace la columna por una nueva y tire la vieja.
